摘要: 目的 观察牛樟芝微囊在体内对肝癌 H22 的影响作用。方法 采用皮下接种肝癌 H22 实体瘤模型观察牛樟芝微囊体内的抑瘤作用。结果 牛樟芝微囊能抑制肝癌 H22 实体瘤小鼠的肿瘤生长，高、中剂量组抑制率分别为 45.24% ( P ＜ 0.01) 和 33.10% ( P ＜ 0.05) 。与模型对照组相比均有显著差异。结论 牛樟芝微囊在体内对肝癌 H22 肿瘤的生长有明显的抑制作用。
关键词: 牛樟芝微囊; 抗肿瘤; H22; 肝癌
牛樟芝来源于多孔菌科多孔菌属多年生蕈菌类，学名为 Antrodia camphorata，俗称牛樟菇、红樟芝、樟内菇、樟菇、血灵芝等。 现代研究表明，牛樟芝的主要活性化合物有多糖，三萜类，甾体类化合物，马来酸及琥珀酸衍生物等，具有护肝、抗癌、调节免疫、去过敏、解毒和抗炎等功效。素有“药芝之王”、“台湾森林中之红宝石”的美誉。科学界认识它时间还算很短，为了证实民间传闻，台湾生化、中西医药界、各大学研究所及政府相关机构均投入大量经费与人力，深入研究牛樟芝的各种功效，完成了许多的研究报告及临床研究、观察。
本课题组前期对牛樟芝的培育及所含多糖类和三萜类化合物的提取工艺，牛樟芝保肝、抗疲劳、辅助降糖的药效学及牛樟芝微囊制备工艺进行了研究， 在此基础上，我们观察了牛樟芝微囊对小鼠体内肝癌的抑制作用，现报道如下。
1 材料与方法
1. 1 试验药物 牛樟芝微囊: 由本实验室自制。微囊的载药量( 三萜类) 为 51mg·g^−1。
1. 2 动物和瘤株: 昆明种小鼠，雄性 20 ～ 22g，清洁级，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证编号: Scxk(泸)2012-0002。瘤株: 肝癌细胞 H22，购自中国科学院上海生命科学院细胞资源中心。用含 10% 胎牛血清的 1640 培养基传代培养。
1. 3 试剂: 培养基: 1640 培养基、胰酶( 含 0.02% EDTA) 为 gibco 公司; 小牛血清( FBS) 、双抗( 青霉素-链霉素) 、细胞培养瓶均为美国 Corning 公司; 二甲基亚枫( DMSO) ，Sigma 产泰京公司分装; 磷酸缓冲溶液( PBS) ，杭州四季青公司。
1. 4 仪器: HEＲACELL 150i 型 CO2 培养箱( 美国 Thermo Scientific 公司) ; BCW-1000 型生物净化工作台，BW-CJ-1K 型空气净化器，( 苏州华宏净化技术有限公司) ; TS100 型倒置光学显微镜( 日本 Nikon 公司) ; TD5Z 型离心机( 湖南凯达科学仪器有限公司) ; BP211D 型电子天平( 美国 Sartorius 公司) 。
1. 5 方法
1. 5. 1 细胞培养: 肝癌细胞 H22，于 37℃、5% CO2 的培养箱中培养，3 ～ 5 天更换 1 次培养液。传代 2 ～ 3 代后即可用于小鼠的接种。
1. 5. 2 体内抗肿瘤实验
1. 5. 2. 1 H22 肝癌小鼠的模型建立: 小鼠适应性饲养 3d 后用于接种肿瘤。取对数生长期的 H22 细胞，消化后用 PBS 稀释成 1 × 10^7 个/mL 的细胞悬液，接种于小鼠腹腔，当小鼠的腹水长大后，抽取腹水，用生理盐水稀释成约 1 × 10^7 个/mL 的细胞悬液，然后每只小鼠接种体积为 0.2mL。
1. 5. 2. 2 牛樟芝微囊对小鼠肝癌 H22 实体瘤的影响: 小鼠随机分成 5 组，即模型对照组( 生理盐水组) ，阳性对照组( 环磷酰胺 30mg·kg^−1) 牛樟芝微囊高、牛樟芝微囊中、牛樟芝微囊低剂量组。剂量分别为 0.4g·kg^−1、0.2g·kg^−1、0.1g·kg^−1。各组灌胃 0.2mL/10g 体重，接种前预先给药 3 天，模型组和阳性组给予等体积生理盐水，阳性组在接种后第 1、3、5 天分别腹腔注射环磷酰胺 1 次，接种后再连续给药 12 天。末次给药 24h 后，处死小鼠，剥离肿瘤，取脾和胸腺，分别称重，按以下公式分别计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数：
抑瘤率/% = ( 模型组平均瘤重 － 给药组平均瘤重) /模型组平均瘤重 × 100%
胸腺( 脾) 重量系数( mg/10g) = 胸腺( 脾) 重量/小鼠体重 × 10
2 结果
牛樟芝微囊对肝癌 H22 小鼠有抑制作用，且呈剂量依赖性，其中牛樟芝微囊高、中剂量组对 H22 肝癌的抑制率分别为 45.24% 和 33.10% ，与模型对照组相比有显著差异( P ＜ 0.01 和 P ＜ 0.05) ，牛樟芝微囊低剂量组对 H22 肝癌的抑制率为 27.46% ，但差异不显著; 给药组的脾指数和胸腺指数与模型对照组比较无明显差异，但给药组的胸腺指数与阳性对照组 CY 比较有显著差异( P ＜ 0.01 和 P ＜ 0.05) 。结果( 见表 1) 。
3 讨论
近年来，随着社会经济发展和人民生活水平提高，我国的疾病谱和死亡谱发生显著变化恶性肿瘤的发病率呈现逐年上升趋势。据有关数据显示，我国居民恶性肿瘤死亡率比 70 年代中期增加了 83.1% 。其中，恶性肿瘤是目前全世界的主要死亡原因之一，已经成为严重危害人类生命健康、制约社会经济发展的一大类疾病。因此，提高恶性肿瘤的治疗和预防水平，控制肿瘤向恶性发展尤为重要。
牛樟芝味苦、寒，易伤阳败胃。年老体弱、胃虚少食、脾胃虚寒、体质虚弱者可能会出现呕吐、腹泻、腹痛等症状。把牛樟芝提取物做成微囊，可以掩盖牛樟芝的不良口味; 还能够提高药物的稳定性; 并减少药物对胃的刺激; 并通过微囊化方法形成缓控释制剂和靶向制剂，以达到更大限度的发挥药效的目的。( 洪华炜，王光磊，吴华嵩 福建省中医药研究院 福州 350003)
